微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作1. 1. 器具的滅菌器具的滅菌2. 2. 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制3. 3. 培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌4. 4. 倒平板倒平板5. 5. 微生物接種微生物接種6. 6. 恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)7. 7. 菌種的保存菌種的保存2021/8/251培養(yǎng)基配制原理? 微生物的生長繁殖時需要各種營養(yǎng)物質(zhì)，一般包括水、無機(jī)鹽、碳源和氮源，有的還需要少量特殊營養(yǎng)物質(zhì)（生長因子）根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌x擇不同的原料配制不同培養(yǎng)基本課題使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，它是一種應(yīng)用最廣泛和最普遍的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，也稱普通培養(yǎng)基它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl，其中牛肉膏為細(xì)菌提供碳源和能源，磷酸鹽；蛋白胨主要提供氮源；而NaCl提供無機(jī)鹽在配制固體培養(yǎng)基時還要加入瓊脂作凝固劑在培養(yǎng)細(xì)菌時要用稀酸或稀堿將pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長繁殖2021/8/252四、實(shí)驗(yàn)操作四、實(shí)驗(yàn)操作(一一)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細(xì)菌用于培養(yǎng)細(xì)菌)2021/8/2531．計(jì)算、稱量．計(jì)算、稱量2．溶化．溶化3．調(diào)．調(diào)pH：?。骸H7．．6　　4．過濾：這一步可以省去。

．過濾：這一步可以省去5．分裝：分裝過程中注意不要使培．分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染分裝三角燒瓶的量以塞而引起污染分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜不超過三角燒瓶容積的一半為宜6．加塞．加塞7．包扎．包扎操作步驟操作步驟2021/8/2548．滅菌．滅菌: 將將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為、溫度為121℃，滅菌，滅菌15～～30min將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～～170 ℃下滅下滅菌菌2h2021/8/255倒平板技術(shù)倒平板技術(shù)1.將滅過菌的將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，焰旁的桌面上，右手拿裝有培右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞左手撥出棉塞12342021/8/256倒平板技術(shù)倒平板技術(shù)2.右手拿錐形右手拿錐形瓶，使瓶口迅瓶，使瓶口迅速通過火焰。

速通過火焰12342021/8/257倒平板技術(shù)倒平板技術(shù)12343.用左手的拇指用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于打開一條稍大于瓶口的縫隙，右瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的手將錐形瓶中的培養(yǎng)基培養(yǎng)基(約約10~20mL)倒入培養(yǎng)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋2021/8/258倒平板技術(shù)倒平板技術(shù)12344.等待平板冷等待平板冷卻凝固，大約卻凝固，大約需需5~10min然后，將平板然后，將平板倒過來放置，倒過來放置，使皿蓋在下，使皿蓋在下，皿底在上皿底在上2021/8/259 9．倒平板．倒平板: 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50 ℃左右時，在酒左右時，在酒精燈附近倒平板倒平板操作見課本）精燈附近倒平板倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種種. 10．無菌檢查：．無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培的溫室中培養(yǎng)養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底小時，以檢查滅菌是否徹底2021/8/2510平板劃線的操作方法平板劃線的操作方法2021/8/25112021/8/25122021/8/25132021/8/25142021/8/25152021/8/25162021/8/25172021/8/25182021/8/25192021/8/25202021/8/2521 一旦劃破，會造成劃線不均勻，一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；難以達(dá)到分離單菌落的目的； 二是存留在劃破處的單個細(xì)胞無法二是存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。

處生長，會形成一個條狀的菌落2021/8/2522 一旦劃破，會造成劃線不均勻，一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；難以達(dá)到分離單菌落的目的； 二是存留在劃破處的單個細(xì)胞無法二是存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落處生長，會形成一個條狀的菌落2021/8/25232021/8/25242021/8/2525注意：注意： 1、、 移液管需要經(jīng)過滅菌操作移液管需要經(jīng)過滅菌操作時，試管口和移液管離火焰時，試管口和移液管離火焰1~2cm處處.2021/8/2526微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)2021/8/2527微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)2021/8/2528斜面制備培養(yǎng)基配制分裝滅菌擺放斜面2021/8/2529接種的注意點(diǎn)：（1）用接種環(huán)取菌種之前、每次劃線之前和劃線結(jié)束都要進(jìn)行灼燒滅菌，灼燒后要在酒精燈附近冷卻后再操作；（2）劃線時不要劃破培養(yǎng)基，如果采用分段劃線法操作從第二次操作應(yīng)總在上一次劃線末端開始，首尾區(qū)不能相連；（3）操作必須始終在酒精燈火焰旁進(jìn)行。

2021/8/2530菌種的保存菌種的保存1.臨時保藏臨時保藏：： 接種到固體斜面培接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置養(yǎng)基，菌落長成后置于于4℃冰箱保存冰箱保存2.長期保存長期保存：： 甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法2021/8/2531 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫保溫1～～2 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新基的制備是成功的，否則需要重新制備2021/8/2532 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)求，需要分析原因，再次練習(xí)2021/8/2533。