免疫比濁法檢測免疫球蛋白免疫學(xué)系免疫學(xué)系免疫比濁法檢測免疫球蛋白免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成特異結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成光的折射或吸收，光的折射或吸收，測定這種折射或吸收后測定這種折射或吸收后的透射光或散射光的透射光或散射光作為計算單位作為計算單位免疫比濁法檢測免疫球蛋白免免疫疫比比濁濁法法分分類類當(dāng)一束光當(dāng)一束光線通過溶線通過溶液受到光液受到光散射和光散射和光吸收兩個吸收兩個因素的影因素的影響而使光響而使光的強度減的強度減弱弱透射比濁法透射比濁法透射比濁法透射比濁法: : : :在光源的光路方向（在光源的光路方向（在光源的光路方向（在光源的光路方向（0 0 0 00 0 0 0））））測量透射光強度和被檢測測量透射光強度和被檢測測量透射光強度和被檢測測量透射光強度和被檢測溶液微粒濃度關(guān)系的方法溶液微粒濃度關(guān)系的方法溶液微粒濃度關(guān)系的方法溶液微粒濃度關(guān)系的方法散射比濁法散射比濁法散射比濁法散射比濁法: : : :在光源的光路方向（在光源的光路方向（在光源的光路方向（在光源的光路方向（5 5 5 50-0-0-0-969696960 0 0 0））））角的方向上測量透射光強度角的方向上測量透射光強度角的方向上測量透射光強度角的方向上測量透射光強度和被檢測溶液中微粒濃度關(guān)和被檢測溶液中微粒濃度關(guān)和被檢測溶液中微粒濃度關(guān)和被檢測溶液中微粒濃度關(guān)系的方法。

系的方法系的方法系的方法免疫比濁法檢測免疫球蛋白 透射比濁法和散射比濁法透射比濁法和散射比濁法光路光路檢測器檢測器A檢測器檢測器B?IC?I0?Iθθ??Iθ 透射比濁法透射比濁法 散射比濁散射比濁法法免疫比濁法檢測免疫球蛋白（一）（一）基本原理基本原理v 是個極其簡單的方法在抗原過量情況下是個極其簡單的方法在抗原過量情況下，，與待測與待測樣品中相應(yīng)的樣品中相應(yīng)的IgIg發(fā)生抗原發(fā)生抗原- -抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變物，使反應(yīng)介質(zhì)的濁度發(fā)生改變v 測量方法利用分光光度計測量被吸收的量讀數(shù)以測量方法利用分光光度計測量被吸收的量讀數(shù)以吸收單位（吸收單位（A A）或）或ODOD值表示，值表示，A A值反映了入射光和透射光值反映了入射光和透射光的比率待測物中的比率待測物中IgIg含量可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出含量可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出v 待測樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射待測樣品中的抗原含量與吸光度呈正比，而與透射光呈反比光呈反比v 反應(yīng)在反應(yīng)在PEGPEG的作用下，加速復(fù)合物的形成。

的作用下，加速復(fù)合物的形成 免疫透射比濁法免疫透射比濁法免疫比濁法檢測免疫球蛋白透射比濁法測定原理光光 源源誘誘導(dǎo)導(dǎo)劑劑免疫比濁法檢測免疫球蛋白樣品光電計濾光片光源透射比濁法測定原理免疫比濁法檢測免疫球蛋白透射比濁法的缺陷：(1)溶液中存在的抗原－抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大，分子太小則阻擋不了光線的通過2)溶液中的抗原－抗體復(fù)合物的數(shù)量要足夠多如果數(shù)量太小，溶液濁度變化太小，對光通量影響不大3) 透射比濁是依據(jù)透射光減弱的原理來定量的，因此只能測定抗原－抗體反應(yīng)的第二階段，檢測仍需抗原－抗體溫育反應(yīng)時間，檢測時間較長光通量是每單位時間到達(dá)、離開或通過曲面光通量是每單位時間到達(dá)、離開或通過曲面的的光能數(shù)量光能數(shù)量?免疫比濁法檢測免疫球蛋白??原理原理散射比濁法散射比濁法在入射光的在入射光的一定角度一定角度檢測粒子發(fā)出的散檢測粒子發(fā)出的散射光，射光，散射光的強度與散射光的強度與ICIC的含量呈正比的含量呈正比免疫比濁法檢測免疫球蛋白散射比濁法測定原理增增增增 加加加加 散散散散 透透透透 率率率率 : 660nm : 660nm 測測 定定定定 散散散散 射射射射 光光光光聚集聚集形成形成誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)劑免疫比濁法檢測免疫球蛋白散射光測定散射光測定檢測器 (LED)光電計樣品100 %0 %時間散射光強度免疫比濁法檢測免疫球蛋白 速率散射比濁法速率散射比濁法 （一）（一）基本原理基本原理 — — 是測定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程。

是測定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程 — — 所謂速率，是在所謂速率，是在單位時間內(nèi)單位時間內(nèi)抗原抗體結(jié)合形成抗原抗體結(jié)合形成 復(fù)合物的速度將各單位時間內(nèi)形成復(fù)合物的復(fù)合物的速度將各單位時間內(nèi)形成復(fù)合物的 速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài)速率及測定的散射信號連接在一起，即是動態(tài) 的速率比濁分析的速率比濁分析 — — 當(dāng)儀器測定到某一時當(dāng)儀器測定到某一時 間內(nèi)形成速率下降時，間內(nèi)形成速率下降時， 即出現(xiàn)即出現(xiàn)速率峰速率峰，該峰，該峰 值的高低，即代表所值的高低，即代表所 測抗原的量測抗原的量免疫比濁法檢測免疫球蛋白CONCENTRATIONRATE在速率峰基礎(chǔ)上完成的標(biāo)準(zhǔn)曲線在速率峰基礎(chǔ)上完成的標(biāo)準(zhǔn)曲線免疫比濁法檢測免疫球蛋白方法評價：方法評價： 敏感度高敏感度高 快速快速( (不必達(dá)平衡）不必達(dá)平衡） 抗原抗體結(jié)合的動態(tài)測定，理論上測定不抗原抗體結(jié)合的動態(tài)測定，理論上測定不受本底散射信號的影響受本底散射信號的影響 可檢測微量樣品可檢測微量樣品免疫比濁法檢測免疫球蛋白? 原理原理2.2.終點散射比濁法終點散射比濁法讓抗原抗體作用一定時間，使其反應(yīng)讓抗原抗體作用一定時間，使其反應(yīng)達(dá)到平衡達(dá)到平衡后，后，測定其測定其ICIC形成的量。

形成的量ICIC的濁度不再受時間的影響的濁度不再受時間的影響，，但反應(yīng)但反應(yīng)ICIC聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前，進(jìn)行濁度測定聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前，進(jìn)行濁度測定免疫比濁法檢測免疫球蛋白散射比濁法散射比濁法的缺陷的缺陷(1)(1)因為是一次性測定光吸收值，沒有考慮每一因為是一次性測定光吸收值，沒有考慮每一個待測樣本的吸收和散射效果，可測定結(jié)果不個待測樣本的吸收和散射效果，可測定結(jié)果不準(zhǔn)確準(zhǔn)確(2)(2)測定的仍是抗原－抗體反應(yīng)的第二階段，不測定的仍是抗原－抗體反應(yīng)的第二階段，不適合快速檢測適合快速檢測3) (3) 終點法存在反應(yīng)本底終點法存在反應(yīng)本底，測定樣本的含量越低，測定樣本的含量越低本底比例越大，故在微量測定時，本底的干擾本底比例越大，故在微量測定時，本底的干擾是影響準(zhǔn)確測定的重要因素是影響準(zhǔn)確測定的重要因素 免疫比濁法檢測免疫球蛋白影響免疫比濁測定的因素1 1、抗原抗體比例、抗原抗體比例2 2、抗體的質(zhì)量、抗體的質(zhì)量 抗體的特異性、效價、親和力抗體的特異性、效價、親和力3 3、反應(yīng)的溶液、反應(yīng)的溶液4 4、增濁劑的使用、增濁劑的使用免疫比濁法檢測免疫球蛋白1 1、透射比濁操作簡便，適用于普通的自動生化分析儀、透射比濁操作簡便，適用于普通的自動生化分析儀和普通的分光光度計，幾乎所有的實驗室均能開展。

不和普通的分光光度計，幾乎所有的實驗室均能開展不足的是靈敏度和精密度均不夠理想，所需的抗血清量大，足的是靈敏度和精密度均不夠理想，所需的抗血清量大，檢測的周期較長檢測的周期較長2 2、散射比濁的優(yōu)點是靈敏度、精密度均較高，檢測快、散射比濁的優(yōu)點是靈敏度、精密度均較高，檢測快速其缺點是需特定的分析儀器，試劑價格高其缺點是需特定的分析儀器，試劑價格高透射比濁法和散射比濁法優(yōu)缺點比較透射比濁法和散射比濁法優(yōu)缺點比較免疫比濁法檢測免疫球蛋白免疫濁度法測定中應(yīng)注意的問題免疫濁度法測定中應(yīng)注意的問題1 1、偽濁度的影響、偽濁度的影響?????????? ?????????? 偽濁度形成原因很復(fù)雜，主要偽濁度形成原因很復(fù)雜，主要是抗血清含有非特異性的交叉反應(yīng)性雜抗體成分；增濁是抗血清含有非特異性的交叉反應(yīng)性雜抗體成分；增濁劑濃度和反應(yīng)時間掌握不當(dāng)；樣品本身的濁度處理不當(dāng)；劑濃度和反應(yīng)時間掌握不當(dāng)；樣品本身的濁度處理不當(dāng)；試劑的污染和變質(zhì)；器材尤其是比色杯等不夠清潔等因試劑的污染和變質(zhì)；器材尤其是比色杯等不夠清潔等因素2 2、非特異性散射光的影響、非特異性散射光的影響????? ????? 免疫濁度法經(jīng)常受內(nèi)源性光散射的干擾，免疫濁度法經(jīng)常受內(nèi)源性光散射的干擾，為避免這些非特異性光散射的影響，應(yīng)用透射比濁法時為避免這些非特異性光散射的影響，應(yīng)用透射比濁法時需保證抗體組分在需保證抗體組分在3 3％以下，散射比濁法需保證在％以下，散射比濁法需保證在 0.50.5％以下。

％以下???免疫比濁法檢測免疫球蛋白本實驗中應(yīng)用聚乙二醇的生理特性本實驗中應(yīng)用聚乙二醇的生理特性 聚乙二醇是聚乙二醇是中性、無毒中性、無毒且具有獨特理化性質(zhì)和良好的且具有獨特理化性質(zhì)和良好的生物相溶性的高分子聚合物，生物相溶性的高分子聚合物，聚乙二醇即聚乙二醇即PEGPEG具有高度具有高度的親水性的親水性，在水溶液中有較大的水動力學(xué)體積，并且，在水溶液中有較大的水動力學(xué)體積，并且沒有免疫原性沒有免疫原性當(dāng)藕聯(lián)到藥物分子或藥物表面時，可當(dāng)藕聯(lián)到藥物分子或藥物表面時，可以將其優(yōu)良性質(zhì)賦予修飾后的藥物分子，以將其優(yōu)良性質(zhì)賦予修飾后的藥物分子，改變它們在改變它們在水溶液中的生物分配行為和溶解性水溶液中的生物分配行為和溶解性，在其修飾的藥物，在其修飾的藥物周圍產(chǎn)生空間屏障，減少藥物的酶解，避免在腎臟的周圍產(chǎn)生空間屏障，減少藥物的酶解，避免在腎臟的代謝中很快消除，并使藥物能被免疫系統(tǒng)的細(xì)胞識別代謝中很快消除，并使藥物能被免疫系統(tǒng)的細(xì)胞識別免疫比濁法檢測免疫球蛋白1.1.免疫球蛋白試劑免疫球蛋白試劑A,M,GA,M,G2.2.免疫球蛋白試劑免疫球蛋白試劑A,M,GA,M,G校準(zhǔn)品，蒸餾水校準(zhǔn)品，蒸餾水3.3.微量加樣槍微量加樣槍4.4.分光光度儀分光光度儀免疫比濁法檢測免疫球蛋白Ig濃度（g/L）=×?Ig校準(zhǔn)濃度（g/L）樣本管吸光度校準(zhǔn)管濃度免疫比濁法檢測免疫球蛋白免疫比濁法檢測免疫球蛋白此課件下載可自行編輯修改，供參考！此課件下載可自行編輯修改，供參考！感謝你的支持，我們會努力做得更好！感謝你的支持，我們會努力做得更好！。