課題結(jié)題報告結(jié)題報告結(jié)題報告腎早期損傷定位標(biāo)志物研究腎早期損傷定位標(biāo)志物研究 重慶三峽中心醫(yī)院重慶三峽中心醫(yī)院 杜紅心杜紅心 立立 項項 依依 據(jù)據(jù) 研研 究究 內(nèi)內(nèi) 容容 研研 究究 結(jié)結(jié) 果果 項項目目完完成成情情況況 預(yù)預(yù) 實實 驗驗 結(jié)結(jié) 果果 經(jīng)經(jīng) 費費 來來 源源一一、、立立 項項 依依 據(jù)據(jù) 研究背景研究背景?妊娠期糖代謝異常：包括妊娠期糖耐量受損妊娠期糖代謝異常：包括妊娠期糖耐量受損（（GIGT））和妊娠期糖尿病和妊娠期糖尿?。ǎ℅DM））?GIGT：一組已有糖代謝異常并可能向糖尿?。阂唤M已有糖代謝異常并可能向糖尿病發(fā)展的病理生理過程的中間階段發(fā)展的病理生理過程的中間階段?GDM：妊娠期首次發(fā)生或發(fā)現(xiàn)的不同程度的：妊娠期首次發(fā)生或發(fā)現(xiàn)的不同程度的糖代謝異常糖代謝異常 近年的研究表明近年的研究表明, GDM 與與GIGT 的總體發(fā)病率的總體發(fā)病率逐年升高逐年升高,達(dá)達(dá)7.61 %追蹤研究顯示追蹤研究顯示30 % -50%的的GDM患者可在遠(yuǎn)期發(fā)生糖尿病，且有糖尿病家族史患者可在遠(yuǎn)期發(fā)生糖尿病，且有糖尿病家族史者，者，GDM患病機(jī)率增加，提示其有一定的免疫遺傳患病機(jī)率增加，提示其有一定的免疫遺傳學(xué)背景學(xué)背景 。

研究背景研究背景 妊妊娠娠期期糖糖代代謝謝異異常常對對妊妊娠娠的的影影響響最最常常見見的的是是導(dǎo)導(dǎo)致致巨巨大大兒兒、、胎胎兒兒窘窘迫迫和和新新生生兒兒低低血血糖糖的的發(fā)發(fā)生生；；以以及及并并發(fā)發(fā)血血管管病病變變，，增增加加妊妊娠娠期期高高血血壓壓和和手手術(shù)術(shù)產(chǎn)產(chǎn)的的發(fā)發(fā)生生率率國國內(nèi)內(nèi)外外的的數(shù)數(shù)據(jù)據(jù)表表明明：：未未治治療療的的GDM孕孕婦婦并并發(fā)發(fā)癥癥明明顯顯增增加加，，且且圍圍生生兒兒患患病病率率主主要要與與治治療療早早晚晚有有關(guān)關(guān)，，證證明明早早期期篩篩查查、、診診斷斷、、干干預(yù)預(yù)可可以以降降低低孕產(chǎn)婦的并發(fā)癥及圍生兒患病率孕產(chǎn)婦的并發(fā)癥及圍生兒患病率研究背景研究背景 妊妊娠娠期期糖糖代代謝謝異異常常的的發(fā)發(fā)生生與與遺遺傳傳、、環(huán)環(huán)境境及及生生活活習(xí)習(xí)慣慣密密切切相相關(guān)關(guān), 近近年年來來國國內(nèi)內(nèi)外外的的研研究究表表明明, 某某些些基基因因的的多多態(tài)態(tài)性性對對妊妊娠娠期期糖糖代代謝謝異異常常的的發(fā)發(fā)生生可可能能具具有有重重要要作作用用如如：：葡葡萄萄糖糖轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)運運蛋蛋白白基基因因、、葡葡萄萄糖糖激激酶酶基基因因、、磺磺脲脲類類藥藥物物受受體體基基因因、、胰胰島島素素受受體體底底物物基基因因、、人人類類主主要要組組織織相相容容性性基基因因復(fù)復(fù)合合體體以以及及鈣鈣蛋蛋白白酶酶-10基基因因、、尾尾加加壓壓素素Ⅱ基基因因、、腫腫瘤瘤壞壞死死因因子子-α基基因因等等均均與與妊妊娠娠期期糖糖代代謝謝異異常常發(fā)發(fā)病病有有一一定定關(guān)聯(lián)。

關(guān)聯(lián)立項依據(jù)立項依據(jù) 但但是是目目前前已已有有的的研研究究成成果果還還存存在在爭爭議議, 引引起起疾疾病病的責(zé)任基因及其作用機(jī)理的責(zé)任基因及其作用機(jī)理尚未明確尚未明確因此對致病基因此對致病基因的研究已日益成為臨床診療的迫切需要探究及因的研究已日益成為臨床診療的迫切需要探究及篩選與妊娠期糖代謝異常相關(guān)的基因多態(tài)性篩選與妊娠期糖代謝異常相關(guān)的基因多態(tài)性, 將會對將會對妊娠合并糖尿病、妊娠合并糖尿病、GDM及及GIGT的預(yù)防、治療、改的預(yù)防、治療、改善預(yù)后及提高廣大妊娠婦女圍產(chǎn)期的生命質(zhì)量起到善預(yù)后及提高廣大妊娠婦女圍產(chǎn)期的生命質(zhì)量起到十分積極而重要的作用同時十分積極而重要的作用同時, 對節(jié)約醫(yī)療資源、提對節(jié)約醫(yī)療資源、提高出生人口質(zhì)量也將有十分重要的意義高出生人口質(zhì)量也將有十分重要的意義立項依據(jù)立項依據(jù)二二 、、 研研 究究 內(nèi)內(nèi) 容容 對對葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白基因、基因、磺脲類藥物受體磺脲類藥物受體基因、基因、人類主要組織相容性復(fù)合體人類主要組織相容性復(fù)合體基因、基因、鈣蛋白酶鈣蛋白酶-10-10基基因、因、尾加壓素尾加壓素ⅡⅡ基因等五個可能的糖代謝異常相基因等五個可能的糖代謝異常相關(guān)基因及其相關(guān)位點的關(guān)基因及其相關(guān)位點的多態(tài)性多態(tài)性進(jìn)行研究，以明晰進(jìn)行研究，以明晰它們與妊娠期糖代謝異常的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

觀它們與妊娠期糖代謝異常的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系觀察可能與察可能與GIGT、、GDM及及T2DM的發(fā)生有關(guān)的的發(fā)生有關(guān)的危險危險因素因素研究內(nèi)容研究內(nèi)容關(guān)鍵技術(shù)或方法關(guān)鍵技術(shù)或方法1采用酚采用酚- -氯仿法提取基因組氯仿法提取基因組DNA23PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因片段技術(shù)擴(kuò)增目的基因片段PCR-RFLP方法檢測基因型方法檢測基因型4logistic回歸進(jìn)行數(shù)據(jù)分析回歸進(jìn)行數(shù)據(jù)分析研究對象研究對象研究對象研究對象NGT組組GIGT組組GDM組組T2DM組組100例例,貴陽醫(yī)學(xué)院附貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科屬醫(yī)院內(nèi)分泌科100例例, 貴陽市婦幼保貴陽市婦幼保健院門診健康體檢者健院門診健康體檢者 各各100例例, 貴陽市婦幼貴陽市婦幼保保健院門診患者健院門診患者實驗方法實驗方法1. GDM及及GIGT的診斷方法（的診斷方法（NDDG標(biāo)準(zhǔn)）標(biāo)準(zhǔn)）◆ 1、、50g葡萄糖負(fù)荷試驗篩查葡萄糖負(fù)荷試驗篩查, ＞＞7.8mmol/L為陽性者做為陽性者做糖耐量試驗糖耐量試驗(OGTT) ◆◆ 2、、OGTT試驗：抽血前禁食試驗：抽血前禁食8～～12h, 75g葡萄糖溶葡萄糖溶300ml水中水中3～～5min服完服完, 查空腹及服糖后查空腹及服糖后1、、2、、3 h血糖。

兩次血糖兩次≥5.8、、10.6、、9.2、、8.1mmol/L者診斷為者診斷為GDM；兩次空腹；兩次空腹血糖血糖≥5.8或糖篩或糖篩≥10.6mmol/L, 空腹血空腹血≥5.8mmol/L即診斷即診斷為為GDM◆◆ OGTT 4項中任何一項異?；虻陧椫腥魏我豁棶惓；虻?小時小時≥6.7mmol/L診斷為診斷為GIGT診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷標(biāo)準(zhǔn)2. T2DM的診斷標(biāo)準(zhǔn)（的診斷標(biāo)準(zhǔn)（1999年年WHO標(biāo)準(zhǔn)）標(biāo)準(zhǔn)）◆◆ 糖尿病癥狀糖尿病癥狀+任意時間血漿葡萄糖水平任意時間血漿葡萄糖水平≥11.1 mmol/L或或◆◆ 空腹血漿葡萄糖空腹血漿葡萄糖(FPG)水平水平≥7.0mmol/L或或◆◆ OGTT試驗中，試驗中，2h-PG水平水平≥11.1 mmol/L 診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷標(biāo)準(zhǔn)全血全血DNA的提取的提取PCR-RFLP、、PCR-AFLP凝膠電泳分離凝膠電泳分離收集標(biāo)本收集標(biāo)本PCR擴(kuò)增目的片段擴(kuò)增目的片段基因型的判定基因型的判定數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理實驗步驟實驗步驟計數(shù)資料：計數(shù)資料：計數(shù)資料：計數(shù)資料：基因頻率及基因型頻率：基因頻率及基因型頻率：基因頻率及基因型頻率：基因頻率及基因型頻率：計量資料：計量資料：計量資料：計量資料：危險因素采用危險因素采用危險因素采用危險因素采用logisticlogisticlogisticlogistic回歸分析回歸分析回歸分析回歸分析 百分?jǐn)?shù)描述百分?jǐn)?shù)描述 （（? ?X±SX±S）描述，）描述，采用采用t t檢驗檢驗 Hardy-Weinberg平衡檢平衡檢驗；卡方檢驗，驗；卡方檢驗，P P＜＜0.050.05統(tǒng)計學(xué)統(tǒng)計學(xué)統(tǒng)計學(xué)統(tǒng)計學(xué)處理處理處理處理數(shù)據(jù)分析及處理：數(shù)據(jù)分析及處理：三三 、、 研研 究究 結(jié)結(jié) 果果實驗數(shù)據(jù)及圖表：實驗數(shù)據(jù)及圖表：12型型:404,372bp11型型:372bp22型型:404bpCAPN-10 19位點多態(tài)性分析位點多態(tài)性分析：：CAPN-10 43位點多態(tài)性分析位點多態(tài)性分析：：GG型型:144bpAA型型:121,23bpGA型型:144,121,23bpCAPN-10 63位點多態(tài)性分析位點多態(tài)性分析：：CT型型:192,162,30bpTT型型:192bpCC型型:162,30bp相關(guān)危險因素分析相關(guān)危險因素分析：：單因素單因素logistic回歸分析結(jié)果回歸分析結(jié)果相關(guān)危險因素分析相關(guān)危險因素分析：：多因素多因素logistic回歸分析結(jié)果回歸分析結(jié)果（（GIGT組、組、GDM組與組與NGT組）組）相關(guān)危險因素分析相關(guān)危險因素分析：：多因素多因素logistic回歸分析結(jié)果回歸分析結(jié)果（（T2DM組與組與NGT組）組）項目完成情況：項目完成情況：主要考核指標(biāo)完成情況主要考核指標(biāo)完成情況 ：：①①對對7 7個可能相關(guān)的基因及其相關(guān)位點的多態(tài)性與妊個可能相關(guān)的基因及其相關(guān)位點的多態(tài)性與妊娠期糖代謝異常的關(guān)系進(jìn)行研究，明晰了它們與娠期糖代謝異常的關(guān)系進(jìn)行研究，明晰了它們與妊娠期糖代謝異常相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展之間的妊娠期糖代謝異常相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展之間的關(guān)系；關(guān)系； ②②根據(jù)實驗室數(shù)據(jù)及統(tǒng)計結(jié)果，我們可以得出以下根據(jù)實驗室數(shù)據(jù)及統(tǒng)計結(jié)果，我們可以得出以下結(jié)論：可能與妊娠期糖代謝異常發(fā)病相關(guān)目的基結(jié)論：可能與妊娠期糖代謝異常發(fā)病相關(guān)目的基因及其位點因及其位點7 7個，它們具體是：個，它們具體是： 技術(shù)指標(biāo)方面技術(shù)指標(biāo)方面:?CAPN-10基因多態(tài)性可能與基因多態(tài)性可能與GDM、、T2DM遺傳易感性有關(guān)；遺傳易感性有關(guān)；?CAPN-10基因基因SNP43位點位點G等位基因可能與等位基因可能與GDM的發(fā)生有關(guān)，而的發(fā)生有關(guān)，而16和和63位點則與位點則與GDM的發(fā)生無關(guān)。

的發(fā)生無關(guān)?CAPN-10基因基因SNP43位點位點G等位基因可能與等位基因可能與T2DM的發(fā)生有關(guān)，而的發(fā)生有關(guān)，而16和和63位點則與位點則與T2DM的發(fā)生無關(guān)的發(fā)生無關(guān)?CAPN-10基因基因SNP43位點多態(tài)性、糖尿病位點多態(tài)性、糖尿病家族史、家族史、BMI和年齡是和年齡是GDM 、、T2DM發(fā)生的發(fā)生的重要危險因素重要危險因素技術(shù)指標(biāo)方面：技術(shù)指標(biāo)方面：?尾加壓素尾加壓素ⅡⅡ基因基因rs228648 rs228648 位點單核苷酸多態(tài)性可位點單核苷酸多態(tài)性可能在決定受研究人群的妊娠期糖尿病遺傳易感性能在決定受研究人群的妊娠期糖尿病遺傳易感性中起重要作用中起重要作用G等位基因可能與等位基因可能與GDM發(fā)生有關(guān)發(fā)生有關(guān), ,而而rs228648rs228648位點的位點的A A型純合子可能是型純合子可能是GDM的一個的一個重要的保護(hù)因素重要的保護(hù)因素?尾加壓素尾加壓素ⅡⅡ基因基因rs228648 rs228648 位點單核苷酸多態(tài)性可位點單核苷酸多態(tài)性可能在決定妊娠期糖尿病遺傳易感性中起重要作用能在決定妊娠期糖尿病遺傳易感性中起重要作用G等位基因可能與妊娠期糖代謝異常發(fā)生有關(guān)，等位基因可能與妊娠期糖代謝異常發(fā)生有關(guān)，rs228648rs228648的基因型頻率與糖尿病家族史有關(guān)聯(lián)。

的基因型頻率與糖尿病家族史有關(guān)聯(lián)技術(shù)指標(biāo)方面：技術(shù)指標(biāo)方面：?GLUT1基因基因型頻率和等位基因頻率在基因基因型頻率和等位基因頻率在GDM、、GIGT和和T2DM中分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義提中分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義提示示GLUT1基因可能與基因可能與GDM、、GIGT遺傳易感性遺傳易感性無關(guān)?TNF-α基因的基因的-308 G/A、、TNF-β基因的基因的+252 A/G單核苷酸多態(tài)性研究顯示：單核苷酸多態(tài)性研究顯示：GDM患者存在患者存在TNF-α啟動子啟動子-308G-A等位基因的突變，可能是等位基因的突變，可能是通過上調(diào)血漿通過上調(diào)血漿TNF-α水平，增加胰島素抵抗，最水平，增加胰島素抵抗，最終導(dǎo)致終導(dǎo)致GDM發(fā)生同時發(fā)生同時TNF-β基因多態(tài)性與基因多態(tài)性與GDM沒有顯著相關(guān)性沒有顯著相關(guān)性技術(shù)指標(biāo)方面：技術(shù)指標(biāo)方面：?脂聯(lián)素基因脂聯(lián)素基因+45位點位點 GG基因型與基因型與GDM的遺傳的遺傳易感性顯著相關(guān)，與易感性顯著相關(guān)，與GIGT的遺傳易感性無關(guān)的遺傳易感性無關(guān)?TCF7L2基因基因rs7903146位點位點 CT基因型與基因型與GDM遺傳易感性顯著相關(guān)，與遺傳易感性顯著相關(guān)，與GIGT的遺傳易的遺傳易感性無顯著相關(guān)性。

感性無顯著相關(guān)性?同時，基因同時，基因-基因的交互作用研究顯示：脂聯(lián)基因的交互作用研究顯示：脂聯(lián)素基因素基因+45位點、位點、TNF-α基因基因-308位點基因型位點基因型之間有交互作用其他基因及位點間未顯示明之間有交互作用其他基因及位點間未顯示明顯的交互作用顯的交互作用技術(shù)指標(biāo)方面：技術(shù)指標(biāo)方面：③③撰寫研究論文撰寫研究論文6 6篇，篇，2 2篇已發(fā)表于國家級核心期篇已發(fā)表于國家級核心期刊；其余均已出投到相關(guān)學(xué)術(shù)刊物待發(fā)表；刊；其余均已出投到相關(guān)學(xué)術(shù)刊物待發(fā)表；④④培養(yǎng)碩士研究生培養(yǎng)碩士研究生2 2名：周龍、闞林名：周龍、闞林20112011年年6 6月，月，二名研究生均以優(yōu)異成績從貴陽醫(yī)學(xué)院畢業(yè)，二名研究生均以優(yōu)異成績從貴陽醫(yī)學(xué)院畢業(yè)，并且獲得碩士學(xué)位并且獲得碩士學(xué)位 技術(shù)指標(biāo)方面：技術(shù)指標(biāo)方面：社會、環(huán)境效益方面社會、環(huán)境效益方面 ：：?社會效益：尋找妊娠期糖代謝異常致病過程中起關(guān)鍵作社會效益：尋找妊娠期糖代謝異常致病過程中起關(guān)鍵作用的基因，具有至關(guān)重要的意義，是近年來婦產(chǎn)科、優(yōu)用的基因，具有至關(guān)重要的意義，是近年來婦產(chǎn)科、優(yōu)生及內(nèi)分泌領(lǐng)域的研究熱點探索及篩選與妊娠期糖代生及內(nèi)分泌領(lǐng)域的研究熱點。

探索及篩選與妊娠期糖代謝異常相關(guān)的基因多態(tài)性謝異常相關(guān)的基因多態(tài)性, ,對妊娠合并糖尿病、對妊娠合并糖尿病、GDM及及GIGT的預(yù)防、治療、改善、預(yù)后及提高廣大妊娠婦女圍的預(yù)防、治療、改善、預(yù)后及提高廣大妊娠婦女圍產(chǎn)期的生命質(zhì)量具有積極的作用產(chǎn)期的生命質(zhì)量具有積極的作用?環(huán)境效益：本研究課題采用成本最低廉的酚環(huán)境效益：本研究課題采用成本最低廉的酚- -氯仿法從外氯仿法從外周血有核細(xì)胞中提取基因組周血有核細(xì)胞中提取基因組DNADNA；然后用針對目的基因片；然后用針對目的基因片段設(shè)計的引物在適當(dāng)條件下進(jìn)行擴(kuò)增；再結(jié)合擴(kuò)增片段段設(shè)計的引物在適當(dāng)條件下進(jìn)行擴(kuò)增；再結(jié)合擴(kuò)增片段長度鑒定技術(shù)和擴(kuò)增長度鑒定技術(shù)和擴(kuò)增DNADNA的限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)，的限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)，有效地分析擴(kuò)增后有效地分析擴(kuò)增后DNADNA堿基序列的改變課題的設(shè)計方法堿基序列的改變課題的設(shè)計方法在降低實驗成本的同時，可確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可在降低實驗成本的同時，可確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性四四 、、 研研 究究 結(jié)結(jié) 果果數(shù)據(jù)分析及處理：數(shù)據(jù)分析及處理：數(shù)據(jù)分析及處理：數(shù)據(jù)分析及處理：。