目的：建立分析方法學(xué)驗(yàn)證的指導(dǎo)程序，用以證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求，保證驗(yàn)證工作能夠有計(jì)劃、按步驟的進(jìn)行，同時(shí)使與質(zhì)量檢驗(yàn)有關(guān)的活動(dòng)符合GMP的要求范圍：適用于本公司所有的分析方法的驗(yàn)證的活動(dòng)職責(zé)：QC：負(fù)責(zé)起草分析方法驗(yàn)證的驗(yàn)證方案、報(bào)告；負(fù)責(zé)按批準(zhǔn)的驗(yàn)證方案執(zhí)行驗(yàn)證；負(fù)責(zé)檢驗(yàn)儀器運(yùn)行和保養(yǎng)QA：負(fù)責(zé)確定分析方法的驗(yàn)證條件、標(biāo)準(zhǔn)、限度及檢驗(yàn)方法；負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案、報(bào)告的審核；QA負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)方案、報(bào)告的批準(zhǔn)1 相關(guān)定義 1.1 分析方法：法是為完成檢驗(yàn)項(xiàng)目而設(shè)定和建立的測(cè)試方法，它詳細(xì)描述了完成分析檢驗(yàn)的每一步驟一般包括分析方法原理、儀器及儀器參數(shù)、試劑、供試品溶液與對(duì)照品溶液的制備，測(cè)定，計(jì)算公式及檢測(cè)限度等 1.2 方法驗(yàn)證：方法驗(yàn)證就是根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，預(yù)先設(shè)置一定的驗(yàn)證內(nèi)容，并通過設(shè)計(jì)合理的實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證所采用的分析方法是否符合檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求在建立產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證 1.3 方法確認(rèn)：在應(yīng)用已驗(yàn)證的藥典方法和其他法定方法前，應(yīng)在當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行方法確認(rèn)來證明方法在該實(shí)驗(yàn)室的適用性2 驗(yàn)證的適用范圍2.1 產(chǎn)品的物料、中間產(chǎn)品、中間過程控制和產(chǎn)品的理化分析方法的驗(yàn)證和確認(rèn)；2.2 清潔驗(yàn)證方法的驗(yàn)證。

3 需要驗(yàn)證的分析項(xiàng)目根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的設(shè)定目的和驗(yàn)證內(nèi)容的不同要求，將需驗(yàn)證的檢驗(yàn)項(xiàng)目分為四類：3.1 鑒別試驗(yàn)；鑒別的目的在于判定被分析物是目標(biāo)化合物，而非其它物質(zhì)用于鑒別的分析方法要求具有較強(qiáng)的專屬性和耐用性3.2 雜質(zhì)的限度檢查與定量測(cè)定；雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如無機(jī)雜質(zhì)，有機(jī)雜質(zhì)等雜質(zhì)檢查分為限度檢查和定量測(cè)定兩部分用于限度檢查的分析方法驗(yàn)證側(cè)重專屬性、檢測(cè)限和耐用性用于定量測(cè)定的分析方法驗(yàn)證強(qiáng)調(diào)專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、范圍、定量限和耐用性3.3 含量測(cè)定；含量測(cè)定對(duì)準(zhǔn)確度要求較高，因此所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準(zhǔn)確度和線性等3.5 除此之外還有一些物理項(xiàng)目的檢測(cè)如粒徑分布、旋光度、熔點(diǎn)和硬度，其要求與其它檢驗(yàn)項(xiàng)目有所不同，通常在進(jìn)行分析方法驗(yàn)證應(yīng)有不同的要求3.6 《中國藥典》2010版關(guān)于不同的檢驗(yàn)項(xiàng)目需要驗(yàn)證不同的內(nèi)容： 項(xiàng)目 內(nèi)容鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)測(cè)定含量測(cè)定定量限度準(zhǔn)確度－+－+精密度重復(fù)性－+－+中間精密度－+①－+①專屬性②++++檢測(cè)限（LOD）－－③+－定量限（LOQ）－+－－線性－+－+范圍－+－+耐用性++++① 已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度；② 如一種方法不夠?qū)伲捎善渌治龇椒ㄓ枰匝a(bǔ)充。

③ 視具體情況予以驗(yàn)證4 驗(yàn)證內(nèi)容4.1 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度一般用回收率表示準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)試4.1.1 驗(yàn)證方法準(zhǔn)確度是定量測(cè)定的必要條件，因此含量測(cè)定、雜質(zhì)定量測(cè)定均需驗(yàn)證準(zhǔn)確度具體方法如下：4.1.1.1 含量測(cè)定：可以用已知純度的對(duì)照品或供試品進(jìn)行測(cè)定也可以用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較如該分析方法已經(jīng)測(cè)試并求出精密度、線性和專屬性，在準(zhǔn)確度也可推算的情況下，準(zhǔn)確度可向制可不必再做4.1.1.2 雜質(zhì)的定量測(cè)定：可以向樣品中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典方法或經(jīng)過驗(yàn)證的方法在不能測(cè)得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的響應(yīng)因子或不能測(cè)得對(duì)原料藥的相對(duì)響應(yīng)因子的情況下，可用原料藥的響應(yīng)因子應(yīng)明確單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（％）或面積比（％）例如：測(cè)定含量的準(zhǔn)確度, 按標(biāo)示量的80%, 100%和120%配制三個(gè)濃度的溶液，每個(gè)濃度各分別制備3 份供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定根據(jù)測(cè)定結(jié)果與配制濃度計(jì)算出平均回收率以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差4.1.2 數(shù)據(jù)要求：在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。

例如，設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3 份供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（％）或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間4.2 精密度精密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示精密度與準(zhǔn)確度的不同在于精密度測(cè)定了一系列重復(fù)性的被分析物之間的接近程度，但它不能表達(dá)與已建立的真值之間的符合程度，后者由準(zhǔn)確度來測(cè)定通過一系列的測(cè)定值，可以得到良好的精密度，但是由于所用分析方法存在的偏差，所得的平均值不一定與真實(shí)值相符，在這種狀況下，需要修改方法以消除偏差4.2.1 驗(yàn)證方法精密度可從重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性三個(gè)層次考察4.2.1.1 重復(fù)性：在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9 次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)例如，設(shè)計(jì)3 個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3 份供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定3 次，或?qū)⑾喈?dāng)于100％的濃度水平的供試品溶液，用至少測(cè)定6 次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)4.2.1.2 中間精密度：在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度。

為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備4.2.1.3 重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室之間由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法或在不同實(shí)驗(yàn)室之間進(jìn)行方法轉(zhuǎn)移時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)例如建立藥典分析方法時(shí)，通過協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果協(xié)同檢驗(yàn)的目的、過程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中，應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運(yùn)輸4.2.2 數(shù)據(jù)要求：均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）和置信區(qū)間4.3 專屬性專屬性系指在其他成分(如：雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的特性通常,鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定均應(yīng)考察其專屬性如一種方法不夠?qū)伲捎善渌治龇椒ㄓ枰匝a(bǔ)充4.3.1 驗(yàn)證方法4.3.1.1 鑒別試驗(yàn)：用于確認(rèn)被測(cè)成分符合其特征專屬性要求證明其能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分含被測(cè)成分的供試品呈正反應(yīng)，而不含被測(cè)成分的供試品以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，應(yīng)均呈負(fù)反應(yīng)對(duì)于藥品，輔料不得干擾其有效成分的鑒別4.3.1.2 含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定：色譜法和其他分離方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應(yīng)標(biāo)明諸成分在圖中的位置，色譜法的分離度應(yīng)符合要求。

在雜質(zhì)可獲得的情況下，對(duì)于含量測(cè)定，可向試樣中加入雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)和輔料的試樣比較測(cè)定結(jié)果對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定，也可向試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離和檢出，并具有適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與精密度在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬性可通過測(cè)定含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，與另一個(gè)已驗(yàn)證的方法或藥典方法比較結(jié)果或?qū)υ嚇佑脧?qiáng)光照射，高溫，高濕，酸（堿）水解或氧化的方法進(jìn)行加速破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑對(duì)于含量測(cè)定應(yīng)對(duì)比二法測(cè)定的結(jié)果雜質(zhì)檢查應(yīng)比對(duì)破壞前后檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)進(jìn)行峰純度檢查，證明含量測(cè)定成分的色譜峰中不包含其他成分4.4 檢測(cè)限（DL ）檢測(cè)限系指試樣中的被分析物能夠被檢測(cè)出的最低量鑒別試驗(yàn)和雜質(zhì)測(cè)定，均應(yīng)通過測(cè)試確定方法的檢測(cè)限4.4.1 驗(yàn)證方法4.4.1.1非儀器分析目視法：用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量4.4.1.2信噪比法：用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量一般以信噪比為3：1 或2：1 時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。

4.4.1.3 除信噪比法外，還可根據(jù)響應(yīng)因子的標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率計(jì)算出檢測(cè)限LOD = 式中：s為響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差；S為校正曲線的斜率，S= m斜率S可以通過樣品的校正曲線來估算s的值可以由以下途徑估算例如：根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)差（通過幾份空白樣品的分析，然后計(jì)算其響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差，測(cè)出分析背景響應(yīng)值的大?。?，根據(jù)校正曲線（通過對(duì)含有檢測(cè)限范圍內(nèi)被分析物樣品的分析來研究其標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸線的剩余標(biāo)準(zhǔn)差或回歸線的y軸截距標(biāo)準(zhǔn)差都可以作為標(biāo)準(zhǔn)差）4.4.2 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)附測(cè)試圖譜，說明測(cè)試過程和檢測(cè)限結(jié)果4.5 定量限（QL）定量限系指試樣中的被分析物能夠被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和精密度雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測(cè)定方法研究時(shí)，應(yīng)確定方法的定量限4.5.1 驗(yàn)證方法4.5.1.1 常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比為10：1 時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限4.5.1.2 除信噪比法外，還可根據(jù)響應(yīng)因子的標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率計(jì)算出定量限LOD = 式中：s為響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差（通過空白樣品測(cè)背景響應(yīng)值或Y軸截距）；S為校正曲線的斜率（通過樣品的校正曲線求得），S= m斜率S可以通過樣品的校正曲線來估算。

s的值可以由以下途徑估算例如：根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)差（通過幾份空白樣品的分析，然后計(jì)算其響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差，測(cè)出分析背景響應(yīng)值的大?。?，根據(jù)校正曲線（通過對(duì)含有定量限范圍內(nèi)被分析物樣品的分析來研究其標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸線的剩余標(biāo)準(zhǔn)差或回歸線的y軸截距標(biāo)準(zhǔn)差都可以作為標(biāo)準(zhǔn)差）4.6 線性線性系指在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果與試樣中被測(cè)物的濃度直接呈正比關(guān)系的程度線性是定量測(cè)定的基礎(chǔ)，涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目，如雜質(zhì)定量測(cè)定和含量測(cè)定均需驗(yàn)證線性4.6.1 驗(yàn)證方法應(yīng)在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試樣品的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備5個(gè)濃度的供試樣品每一個(gè)濃度的樣品3份，以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算4.6.2 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖4.7 范圍范圍系指能夠達(dá)到一定的精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定含量測(cè)定需涵蓋的最低濃度范圍至少為標(biāo)示量的80 -120% (ICH)，推薦包含50%-150%的濃度。

雜質(zhì)的定量測(cè)定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)測(cè)，擬訂為規(guī)定限度的±20%如果含量測(cè)定與雜質(zhì)檢查同時(shí)進(jìn)行，用百分歸一化法，則范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20%至含量限度（或上限）的+20%推薦包含LOQ －規(guī)定限度的＋20%4.8 耐用性耐用性系指測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法可用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)開始研究分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐用性經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說明小的變動(dòng)能否符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，以確保方法有效如果通過耐用性研究發(fā)現(xiàn)分析方法對(duì)某個(gè)或某些測(cè)試條件敏感或要求苛刻，建議在方法中予以寫明4.8.1 典型影響耐用性的變動(dòng)因素包括：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性、樣品的提取次數(shù)、時(shí)間等4.8.2 液相色譜法(HPLC)中的典型的變動(dòng)因素包括：流動(dòng)相的組成和pH值、不同品牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱、柱溫、流速等4.8.3 氣相色譜法(GC)中的典型影響耐用性的變動(dòng)因素包括：不同品牌或不同。